高效液相色譜儀使用中常見(jiàn)的問(wèn)題解析

高效液相色譜儀使用中常見(jiàn)的問(wèn)題解析
 一、問(wèn)：用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關(guān)于漂移問(wèn)題：
溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡
關(guān)于快速變化問(wèn)題：
   1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定
   2、泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
   3、流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
二、問(wèn)：色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問(wèn)題?
答：1、柱效要高
 2、熱穩(wěn)定性好
 3、化學(xué)惰性強(qiáng)
具體選擇應(yīng)注意：
   1、柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析
   2、柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量
   3、液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣，對(duì)膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄
   4、柱長(zhǎng)度。柱越長(zhǎng)，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問(wèn)題，柱子過(guò)長(zhǎng)，分析時(shí)間長(zhǎng)，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長(zhǎng)度
   5、外涂層(柱體)的選擇
   6、另外還有儀器型號(hào)、分析對(duì)象等因素
三、問(wèn)：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
答：1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
 2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
 
四、問(wèn)：從那些方面可以簡(jiǎn)單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?
答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高溫運(yùn)行后，分配容量K不應(yīng)有明顯的下降，否則，說(shuō)明柱子的熱穩(wěn)定性不好。
 2、理論塔板數(shù)n，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后，理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定。
 3、柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒(méi)有大的變化。
 4、噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加。
 5、柱子的去活層，毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后，去活層不應(yīng)該變化，表現(xiàn)在對(duì)強(qiáng)極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。
 
五、問(wèn)：為什么進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套會(huì)對(duì)色譜行為造成影響?
答：進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用：
   1、提供一個(gè)溫度均勻的汽化室，防止局部過(guò)熱。
   2、玻璃的惰性不如不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。
   3、易于拆換清洗 ，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會(huì)逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會(huì)慢慢分解，使基流增加，噪聲增大，通過(guò)清洗玻璃襯套可以消除這種影響。
   4、可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個(gè)進(jìn)樣加熱塊。從以上幾個(gè)方面可以知道玻璃襯套對(duì)色譜行為造成影響的原因。
六、問(wèn)：毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時(shí)，非線性分流的主要原因是什么?
答：1、進(jìn)樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發(fā)生分級(jí)分流。
 2、進(jìn)樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上。
 3、在分流點(diǎn)以前樣品沒(méi)有混合均勻或混合不充分。
 4、系統(tǒng)的進(jìn)樣墊，柱接頭等地方漏氣。