waters 600e-2487 HPLC標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)

1. 準(zhǔn)備
1.1. 使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相（應(yīng)足夠；流動(dòng)相必須用0.45μm濾膜過濾）、樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），更換合適的色譜柱（柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動(dòng)相流向一致）和定量環(huán)。
1.2. 通電前應(yīng)檢查儀器設(shè)備之間的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。

2. 開機(jī)和泵操作
2.1. 開機(jī)
2.1.1. 接通UPS的電源，依次打開斷電保護(hù)器、脫氣機(jī)、600E泵、2487檢測器，待檢測器自檢結(jié)束顯示測量狀態(tài)時(shí)，打開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)。
2.1.2. 打開Millennium32軟件，按「Login...」，輸入用戶名和密碼，按「OK」注冊(cè)進(jìn)入系統(tǒng)主界面。在Project檔內(nèi)選擇所需的項(xiàng)目，右擊『Run Samples』圖標(biāo)，選擇色譜系統(tǒng)“600_2487”后打開QuickSet窗口。
2.2. 更換溶劑
2.2.1. 打開600E泵后，轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄（以下簡稱手柄）至RUN位置；
2.2.2. 將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開參照閥（斷開柱和進(jìn)樣器）；
2.2.3. 按［Direct］鍵使其顯示直接控制屏幕，設(shè)流速為1ml/min（梯度配比閥在0ml/min時(shí)不工作）；
2.2.4. 選擇欲使用的某一溶劑通道，設(shè)其比例為100%，其它為0%；
2.2.5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；
2.2.6. 逆時(shí)鐘轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器從進(jìn)口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑；
2.2.7. 再將輸液管放入新溶劑瓶內(nèi)，繼續(xù)抽吸直到新溶劑出來并無氣泡為止；
2.2.8. 轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至RUN位置，將啟動(dòng)注射器取下并排掉筒內(nèi)的溶劑。
2.2.9. 重復(fù)5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。
2.3. 排氣泡
2.3.1. 打開參照閥，換流動(dòng)相為100%超純水，設(shè)流速為10ml/min（注意：確認(rèn)參照閥是打開的，否則可能損壞安裝好的柱）；
2.3.2. 轉(zhuǎn)動(dòng)進(jìn)口集合管閥手柄至DRAW位置，用啟動(dòng)注射器抽出約10ml水；
2.3.3. 順時(shí)鐘轉(zhuǎn)動(dòng)手柄至INJ位置，緩慢用力使水通過泵頭從參照閥出口管排出（注意不要將氣泡注入泵中）；
2.3.4. 按［Stop flow］屏幕鍵停泵，關(guān)上參照閥。
2.3.5. 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設(shè)流速為10ml/min，沖洗2~5min（或更長時(shí)間）后停泵，重新接上柱。

3.1.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
3.1.3. 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)在平均值的5~10%以內(nèi)。如超出此范圍，可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重復(fù)5.2.3.下的步驟。
3.1.4. 壓力波動(dòng)平穩(wěn)后，換檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相比例沖洗系統(tǒng)。在檢查基線穩(wěn)定性前，讓最少5~6倍柱體積的流動(dòng)相通過系統(tǒng)。
3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內(nèi)選擇所需的儀器方法，按「Monitor」（此后泵由軟件控制），觀察基線和壓力變化。如果沖洗至基線漂移<10-3Au/min，噪聲為10-4Au數(shù)量級(jí)，且壓力平穩(wěn)時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。
3.1.6. 按「Abort」圖標(biāo)（左上第五個(gè)），停止監(jiān)視基線。
3.2. 梯度模式
3.2.1. 按檢驗(yàn)方法規(guī)定的條件沖洗平衡系統(tǒng)，并注意壓力波動(dòng)變化和排氣泡。
3.2.2. 在進(jìn)樣前運(yùn)行1~2次空白梯度。

4. 進(jìn)樣
4.1. 在QuickSet窗口內(nèi)左下部選〈Single〉標(biāo)簽，在Sample Name檔內(nèi)填寫試樣名稱；在Function檔內(nèi)選擇試樣類型（標(biāo)準(zhǔn)選“Inject Standards”；樣品選“Inject Samples”）；在Method Set檔內(nèi)選擇所需的方法組；在Injection Volume檔內(nèi)輸入進(jìn)樣體積；在Run Time檔內(nèi)輸入記錄時(shí)間。
4.2. 用針頭濾器過濾試樣溶液（注射液可不必過濾），用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.2.1. 如按部分裝液法，用微量注射器定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%，并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；
4.2.2. 如按完全裝液法，用定量環(huán)定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的3倍（5~10倍準(zhǔn)確性更佳）。
4.3. 按〈Single〉標(biāo)簽內(nèi)右邊的進(jìn)樣(Inject)按鈕，等待窗口底部狀態(tài)檔內(nèi)顯示“Waiting”后，方可進(jìn)樣。
4.4. 將進(jìn)樣閥手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至Load位置，將注射器針完全插入進(jìn)樣閥入口中，平穩(wěn)地注入試樣溶液，除另有規(guī)定外，讓注射器留在進(jìn)樣閥上，將進(jìn)樣閥手柄快速轉(zhuǎn)動(dòng)至Inject位置，系統(tǒng)將自動(dòng)運(yùn)行，采集數(shù)據(jù)并記錄圖譜。
4.5. 讓進(jìn)樣閥手柄保持在Inject位置，到下次進(jìn)樣前1~2min切換回Load位置，將注射器從進(jìn)樣閥中拔出。
4.6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續(xù)進(jìn)樣，直至完成。

5. 數(shù)據(jù)處理（外標(biāo)法）和打印
5.1. 右擊系統(tǒng)主界面下的『Browse Project』圖標(biāo)，選擇相應(yīng)的項(xiàng)目，按「OK」進(jìn)入Project窗口，選〈Channels〉標(biāo)簽。
5.2. 建立處理方法　選擇一個(gè)待積分的標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選“Review”進(jìn)入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標(biāo)（左邊第一個(gè)）進(jìn)入New Processing Method向?qū)Т翱?，按「OK」。
5.2.1. 劃入一個(gè)感興趣的最窄的峰，按「Next>」；
5.2.2. 劃入一段包含噪聲的基線，按「Next>」；
5.2.3. 劃入一段要積分的區(qū)間，按「Next>」；
5.2.4. 根據(jù)情況選擇最小峰面積和最小峰高，按「Next>」、「Next>」；
5.2.5. 在Name檔內(nèi)輸入各組分峰的名稱，按「Next>」、「Next>」；
5.2.6. 在Method Name檔內(nèi)填寫方法名稱，按「Finish」。退出Review窗口。
5.3. 修改標(biāo)準(zhǔn)　選中所有標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選“Alter Sample”進(jìn)入Alter Sample窗口。
5.3.1. 在Sample Type檔內(nèi)將Unknown改成Standard；
5.3.2. 按「Amount」圖標(biāo)（左上第六個(gè)）進(jìn)入Component Editor窗口；
5.3.3. 按「Copy from Process Method」圖標(biāo)（左上第五個(gè)），選擇剛建立的處理方法，按「Open」，在Value和Units檔內(nèi)分別輸入標(biāo)準(zhǔn)所含各組分的數(shù)值和單位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；
5.3.4. 按「Save」圖標(biāo)存盤，退出Alter Sample窗口。
5.4. 積分　先選中所有標(biāo)準(zhǔn)，再選中所有未知樣品，右擊后選“Process”進(jìn)入Background Processing & Reporting窗口，選Use specified processing methods，在右邊檔內(nèi)選擇剛建立的處理方法，按「OK」。
5.5. 打印　在Project窗口下選〈Results〉標(biāo)簽。
5.5.1. 選中要打印的標(biāo)準(zhǔn)/樣品，右擊后選“Preview”進(jìn)入Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按「OK」進(jìn)入Report Publisher (Preview)窗口，預(yù)覽打印的結(jié)果。按打印(Print)圖標(biāo)（左上第二個(gè)）即可打印結(jié)果。
5.5.2. 按「Close」可進(jìn)入Report Publisher窗口對(duì)報(bào)告方法進(jìn)行修改，完成后按「Print」圖標(biāo)（右數(shù)第二個(gè)）即可打印結(jié)果。
5.6. 數(shù)據(jù)處理完成后，關(guān)閉所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系統(tǒng)，關(guān)閉Millennium32軟件，再依次關(guān)閉電腦主機(jī)、顯示器、打印機(jī)。

6. 清洗系統(tǒng)和關(guān)機(jī)
6.1. 數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續(xù)以工作流動(dòng)相沖洗10min后，換水沖洗。
6.2. 清洗進(jìn)樣閥
6.2.1. 用啟動(dòng)注射器吸10ml超純水；
6.2.2. 將注射針導(dǎo)入口沖洗頭（Rheodyne部件號(hào)7125-054）連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進(jìn)樣口上；
6.2.3. 使進(jìn)樣閥保持在Inject位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。
6.3. 清洗柱
6.3.1. C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上，再用甲醇或乙腈沖洗20min。
6.3.2. Protein PAK60柱先用超純水沖洗90min以上，再用甲醇或乙腈沖洗40min。
6.4. 用水沖洗柱后，分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。
6.5. 清洗完成后，先將流速降到0，再依次關(guān)閉泵、脫氣機(jī)、UPS，斷開電源。
6.6. 填寫使用記錄。