摘要
索氏提取法對(duì)包含在組織內(nèi)部的脂肪等不能完全提取出來(lái),酸分解法常使磷脂分接而損失。而在一定的水分存在下,極性的甲醇及非極性的*混合溶液卻能有效地提取結(jié)合態(tài)脂類(lèi),如脂蛋白、蛋白脂等及磷脂,更為有效。
內(nèi)容
索氏提取法對(duì)包含在組織內(nèi)部的脂肪等不能完全提取出來(lái),酸分解法常使磷脂分接而損失。而在一定的水分存在下,極性的甲醇及非極性的*混合溶液卻能有效地提取結(jié)合態(tài)脂類(lèi),如脂蛋白、蛋白脂等及磷脂,此法對(duì)于高水分生物試樣如鮮魚(yú)、蛋類(lèi)等脂類(lèi)的測(cè)定更為有效。
(1)原理
*-甲醇提取法的原理是將試樣分散于*-甲醇混合液中,于水浴上輕微沸騰,-甲醇混合液與一定的水分形成提取脂類(lèi)的有效溶劑,在使試樣組織中結(jié)合態(tài)脂類(lèi)游離出來(lái)的同時(shí)與磷脂等極性脂類(lèi)的親合性增大,從而有效地提取出全部脂類(lèi)。再經(jīng)過(guò)濾,除去非脂成分,然后回收溶劑,對(duì)于殘留脂類(lèi)要用石油醚提取,定量。
①具塞三角瓶
②電熱恒溫水?。?0~100℃
③提取裝置
④布氏漏斗
⑤具塞離心管
⑥離心機(jī):3000r/min
(3)試劑
①*:97%(體積分?jǐn)?shù))以上。
②甲醇:96%(體積分?jǐn)?shù))以上。
③ *甲醇混合液:按2:1體積比混合。
④ 石油醚。
⑤ 無(wú)水硫酸鈉:以120~135℃干燥1~2h。
(4)操作步驟
①提取
準(zhǔn)確稱(chēng)取均勻樣品5g于具塞三角瓶?jī)?nèi)(高水分食品可加適量硅藻土使其分散),加入60mL*-甲醇混合液(對(duì)于干燥食品,可加入2~3mL水)。連接提取裝置,于650C水浴中,由輕微沸騰開(kāi)始,加熱1h進(jìn)行提取。
②回收溶劑
提取結(jié)束后,取下燒瓶用布氏漏斗過(guò)濾,并用*-甲醇混合液洗滌濾器,燒瓶及濾器中試樣殘?jiān)瑸V液、洗滌液一并收集于具塞三角瓶?jī)?nèi),置65~700C水浴中回收溶劑,至燒瓶?jī)?nèi)物料呈濃稠態(tài),而不能使其干,然后冷卻。
③石油醚萃取、定量
用移液管加入25ml石油醚,然后加入15g無(wú)水硫酸鈉,立即加塞混搖1 min ,將醚層移入具塞離心沉淀管進(jìn)行離心分離(3000r/min)5min.用10mL移液管加入迅速吸取離心管中澄清的石油醚10mL,于已稱(chēng)量至恒量的干燥稱(chēng)量瓶?jī)?nèi),蒸發(fā)去除石油醚,于100~105℃烘箱中烘至恒量(約30 min )。
(5)結(jié)果計(jì)算
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