高效液相色譜法測(cè)定石杉?jí)A甲膠囊的含量

摘要建立了測(cè)定膠囊中石杉?jí)A甲含量的反相高效液相色譜法。SpherisorbC18分析柱，以甲醇—水(50∶50，含0.02%的三乙醇胺)作為流動(dòng)相，在310nm波長檢測(cè)。石杉?jí)A甲在0.2～50μg/mL濃度范圍線性關(guān)系良好。最小檢測(cè)量為1.2ng，方法重現(xiàn)性好，平均回收率為99.59%(n=6)，RSD=1.6%。本法操作簡便、精確。
　　
　　石杉?jí)A甲是我國首先分離得到的一種新生物堿，是一種強(qiáng)效的可逆性AChE抑制劑，能改善老年性記憶功能減退，可顯著提高AD患者的記憶、認(rèn)知和行為功能，無明顯不良反應(yīng)，是治療阿耳茨海默病的一個(gè)有前景的藥物。石杉?jí)A甲片劑的含量測(cè)定采用提取—紫外分光光度法，操作繁復(fù)，結(jié)果往往偏低。本文采用高效液相色譜法測(cè)定了石杉?jí)A甲的含量，表明方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，結(jié)果令人滿意。
　　
　　1、儀器與試藥
　　
　　高效液相色譜儀(本昂儀器P1201)；紫外檢測(cè)器；甲醇(HPLC級(jí))；三乙醇胺(AR級(jí))；重蒸餾水；石杉?jí)A甲對(duì)照品(純度為99.6%)及膠囊(寧波立華制藥有限公司)。
　　
　　2、高效液相色譜定量方法和結(jié)果
　　
　　2.1色譜條件色譜柱：SpherisorbC18，250mm×4.6mm，10μm；流動(dòng)相：甲醇—水(50∶50)，含0.02%的三乙醇胺；檢測(cè)波長：310nm；柱溫：40℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL。
　　
　　2.2溶液的配制石杉?jí)A甲對(duì)照品溶液：精密稱取80℃烘至恒重的石杉?jí)A甲對(duì)照品10mg，置100mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，精密吸取5mL，置100mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，即得石杉?jí)A甲對(duì)照品溶液。取石杉?jí)A甲膠囊20顆，內(nèi)容物研勻。取約200mg精密稱定，置10mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，過濾(0.45μm)，備用，即得供試品溶液。
　　
　　2.3線性范圍精密吸取石杉?jí)A甲對(duì)照品液，加0.01mol/L鹽酸溶液配制成0.2、0.4、1、2、4、8、10、25、50μg/mL的溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣20μL，以石杉?jí)A甲對(duì)照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，主峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：
　　
　　Y＝7784.9X-178.0r＝0.99998
　　
　　線性范圍0.2～50μg/mL。
　　
　　2.4回收率測(cè)定按處方量稱取空白輔料約200mg，精密加入石杉?jí)A甲對(duì)照品約50μg(一式6份)，置10mL量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液，溶解并稀釋至刻度，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣20μL。計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果，石杉?jí)A甲平均回收率為99.59%，RSD＝1.6%(n=6)。
　　
　　2.5空白試驗(yàn)僅加入輔料成分，按回收率試驗(yàn)項(xiàng)下操作，結(jié)果在對(duì)照品的出峰時(shí)間不出現(xiàn)色譜峰。輔料對(duì)主藥測(cè)定無干擾。
　　
　　2.6重現(xiàn)性試驗(yàn)按樣品的測(cè)定方法測(cè)定同一批樣品，結(jié)果含量平均值為標(biāo)示量的97.15%(n=6)，RSD＝1.2%。
　　
　　2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液20μL，分別于0、1、2、4d時(shí)進(jìn)樣測(cè)定其峰面積，計(jì)算，RSD＝0.8%，說明樣品穩(wěn)定性好。
　　
　　2.8樣品的測(cè)定取供試品溶液和石杉?jí)A甲對(duì)照品溶液，分別精密量取上述2種溶液20μL，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品(r)和供試品(x)待測(cè)成分的峰面積，按外標(biāo)峰面積法計(jì)算含量。測(cè)定3批樣品，結(jié)果為標(biāo)示量的95.56%～97.15%。
　　
　　3、討論
　　
　　3.1流動(dòng)相的選擇石杉?jí)A甲為生物堿成分，選擇以甲醇—水系列為流動(dòng)相，經(jīng)試驗(yàn)甲醇—水各種配比(90∶10、80∶20、50∶50)，在30min內(nèi)均不出峰，而在甲醇—水(50∶50)中加入少許三乙醇胺，使流動(dòng)相呈弱堿性，則獲得適宜的保留時(shí)間。
　　
　　3.2檢測(cè)波長的確定取石杉?jí)A甲對(duì)照品，以流動(dòng)相為溶媒，制成適宜濃度，于紫外200～400nm掃描，結(jié)果在310nm處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長為310nm。
　　
　　3.3小結(jié)實(shí)驗(yàn)表明，本法測(cè)定石杉?jí)A甲膠囊含量，樣品穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。并且線性范圍廣、靈敏度高，可用于該制劑溶出度、含量均勻度測(cè)定。本法中輔料對(duì)測(cè)定無干擾，無需樣品預(yù)處理，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。