高效液相色譜法測定紅豆杉組織培養(yǎng)物中sinenxans含量方法
發(fā)布于 2011/03/03閱讀(2978)來源 zxj
摘要
Sinenxan A、sinenxan B和sinenxan C均從紅豆杉(Taxus chinensis)組織培養(yǎng)物中分離得到其結(jié)構(gòu)由NMR與MS確定，其純度經(jīng)HPLC測定均達(dá)到99.0%以上。
內(nèi)容
流動(dòng)相：甲醇—乙腈—水(65∶15∶20)；流速：1.0mL/min；檢測波長：227nm；積分儀衰減：2；紙速：0.1cm/min；靈敏度AUFS：0.02；柱溫：室溫。4 樣品液的制備 收獲待測的培養(yǎng)物，在60℃以下烘干至恒重，研細(xì)，過40目篩為樣品。
精密稱取1.0g，以石油醚(60～90℃)—丙酮(5∶20)超聲波提取30min，過濾。濾渣以丙酮洗滌3次。合并濾液，濃縮至干得粗提物。以1.0mL甲醇溶解，吸取50μL加于Sep-Pak C18預(yù)柱端。分別以水、70%甲醇和90%甲醇各4mL洗脫。收集90%甲醇洗脫液，蒸干溶劑，以甲醇定容1mL為樣品液。5 對(duì)照品的保留時(shí)間吸取sinenxan A、sinenxan B和sinenxan C的對(duì)照品混合溶液10μL進(jìn)樣.
回收率試驗(yàn) 精密稱取1.0g已知含量的樣品，按照“樣品液的制備”項(xiàng)下“以石油醚(60～90℃)—丙酮(5∶20)超聲波提取30min”至“濃縮至干得粗提物”的方法操作，精密吸取10μL對(duì)照品混合溶液，加入所得粗提物中，按照“樣品液的制備”項(xiàng)下“以1.0mL甲醇溶解”至“以甲醇定容1mL為樣品液”的方法操作，制成回收試驗(yàn)樣品液。
精密吸取回收試驗(yàn)樣品液2μL進(jìn)行測定，所得結(jié)果代入回歸方程，計(jì)算回收率。sinenxan A、sinenxan B和sinenxan C的平均回收率(n=3)分別為：(104.4±0.41)%、(103.7±0.47)%、(99.04±0.52)%。8 樣品測定 精密吸取按“樣品液的制備”項(xiàng)下方法制備的樣品液2μL進(jìn)行測定，所得結(jié)果代入回歸方程，計(jì)算含量。每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，以平均數(shù)為測定結(jié)果。
討論
9.1 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2］及作者實(shí)驗(yàn)總結(jié)，運(yùn)用HPLC進(jìn)行紫杉烷類成分的分析測定，流動(dòng)相的組成以甲醇—乙腈—水為較好，其中，乙腈與水的比例決定著色譜峰的形狀及分離效果，甲醇決定著色譜峰的保留時(shí)間(tR)。針對(duì)本文sinenxans的測定，選定配比為65∶15∶20的甲醇—乙腈—水作為最佳流動(dòng)相。若減小甲醇的比例，將會(huì)延長樣品的測定時(shí)間，且較后出峰的sinenxan C會(huì)出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；如增大甲醇的比例，sinenxan各色譜峰的保留時(shí)間均可顯著縮短，然而在進(jìn)行樣品分析時(shí)，由于存在其他成分色譜峰的干擾，會(huì)影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確度。
9.2 被測組分的含量水平會(huì)因培養(yǎng)物樣品之間存在較為顯著的差異而有所不同?？筛鶕?jù)具體情況調(diào)整樣品液的濃度和/或進(jìn)樣量，以滿足樣品的測定要求，得到準(zhǔn)確的測定結(jié)果
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